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凍干多肽的溶解
發布時間:2022-05-30 點擊次數:41

多肽溶解中的主要問題是二級結構的形成。

雖然疏水肽鏈二級結構的形成更明顯,但除了最短的肽鏈外,該現象發生在幾乎所有肽鏈,與極性無關。因此,溶解多肽的第一個原則是用無菌的蒸餾水或去離子水(如果條件允許則用無氧水)。


多肽溶液可能遇到細菌降解。為避免該現象的發生,多肽應溶解在無菌的蒸餾水中,或者用0.45或0.2μm孔徑的濾膜過濾除菌。


包含Cys、Met、Trp的多肽特別容易氧化,因此應該溶于無氧的水中。無氧水可以通過注入惰性氣體(氮、氦、氬)減壓除氣得到。


若多肽不溶于純水,超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。注意:超聲處理會引起溶液發熱和多肽降解。

若多肽中包含多個堿性氨基酸,使用1~10%的乙酸水溶液;對于疏水性非常強的多肽,則使用50%乙酸。

若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用1~10%氨溶液或乙酸乙基或重碳酸鹽等揮發性的堿性緩沖液溶解。pH值在層析前必須調整。


異丙醇和乙腈能溶解中等大小的肽。若肽要上柱,有機溶劑的量則必須很少,否則將嚴重影響滯留時間。

若多肽因為含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烴側鏈而高度疏水,或為中性肽時,DMF或DMSO等膜變性劑的使用,有助于多肽的溶解。


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